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アフィニティクロマトグラフィ、教えてください。

1 :名無しゲノムのクローンさん:02/04/15 01:26
アフィニティクロマトグラフィでレセプターフィッシングを行っています。

アビジンビーズにビオチン化リガンドを固定して、粗画分を投入、
ブロッキング用に1%BSAを含む溶液中、4度で1時間ほどビーズと反応させた後、
0.1%Teen20入りバッファーで洗浄、フラクションにタンパクが検出されなく
なってから、非ビオチン化リガンドを投入して回収という方法で行ったんですが、
十分なタンパク量が回収できず、

試しにビーズにビオチン化リガンドを固定しない系をコントロールとして
行った実験では、なぜか、10倍以上の量のタンパクが回収できるという始末です。

これは何が起こっているんでしょうか?
理由、解決方法等ありましたら教えてください。よろしくおねがいします。

2 :名無しゲノムのクローンさん:02/04/15 01:31
問2.和訳しなさい。
(1)アフィニティクロマトグラフフィー (          )(5点)


3 :名無しゲノムのクローンさん:02/04/15 01:36
ストレプトアビ人B'zにくっつくタンパクは有るよ。付いてきたものをSDS-PAGEしてみな。
あとはlysis条件、ブロッキング条件、結合条件、洗い条件などを検討するだけだよ。
それでもダメなら、実験系を少しずつ変えることだよ。
根気のないやつはタンパク実験には向いてないよ。

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