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ダイレクトシークエンスについてどうか助言を!!

1 :Sage:02/03/09 01:37
PCR産物を使用したダイレクトシークエンスがうまくいかなくて困っています。
卒業まで時間がないためサブクローニングしてられません・・・
使用しているkitはApplied Biosystemsの
BigDye Terminator Cycle Sequencing FS Reaction Kitです。
ゲル抽出して精製したDNAでもほとんど読めません。
そこまで正確に読めなくてもどのような遺伝子か同定できればいいのですが。
いいプロトコールを知っている方、どうか教えて下さい!!

2 :憲正:02/03/09 06:15
イヤだね。

3 :名無しゲノムのクローンさん:02/03/09 10:16
卒業延長age

4 :名無しゲノムのクローンさん:02/03/09 11:32
はっきりいってダイレクトシーケンスあてにしてやるようじゃ実験者としてだめだね。
ちゃんと失敗したときの事を考えて予定組まないと。
とりあえずは切りつめたもう遺伝子取ってるならligationからだからういまくいけばシーケンスまで2日あればなんとかなるでしょ。
サブクローニングをしなさい。

5 :1:02/03/09 15:06
っていうか、うまくいっている研究室もあるんでしょ。
だったら少しでも時間を無駄にしないために試みるのは実験者として当然じゃないの?
>3
データはいっぱいあるから失敗しても卒業延長になんかならないよ。
自分の興味で卒業までに明らかにしたい遺伝子があるだけ。

6 :名無しゲノムのクローンさん:02/03/09 15:31
TAクローニングキットを買ってもらって、一日でサブクローニングすれば
良いんではないでしょうか?

7 :sage:02/03/09 15:49
>>5
ダイレクトシーケンスが失敗した時のために、
並行してサブクローニングもしておく。
時間がないなら、そういう実験計画をたてるべきだ
ってことでしょ。

8 :親切な人:02/03/09 15:50

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9 : :02/03/09 18:50
>>1
シグナルが弱いのか、overlapするのかぐらいは書けや

10 :名無しゲノムのクローンさん:02/03/09 22:02
はっきりいってダイレクトシーケンスあてにしてやるようじゃ実験者としてだめだね。


11 :名無しゲノムのクローン:02/03/09 22:29
>1
がんばれ〜!
今までした人の腕が悪いとか!?
っていうか、2ちゃんねら〜に相談するなよ!(笑)

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